Killing Floor to gra akcji z elementami survival horroru. Akcja gry toczy się w Londynie. Przeprowadzane przez organizację Horzine Biotech eksperymenty genetyczne wymykają się spod kontroli i ludzie zaczynają zmieniać się w mutanty. Laboratoria przeniesiono w podziemia, jednak mutanci zaczęli wydostawać się na powierzchnię ziemi. Gracz kieruje postacią jednej z 6 osób, które mają za zadanie powstrzymać mutację. Użytkownik ma możliwość starć z 9 typami przeciwników (atakujących zębami, pazurami, karabinami, rakietnicami czy piłami spalinowymi). Ma do dyspozycji również 12 rodzajów broni, m.in.: miotacze ognia, strzelby, karabiny szturmowe, maczety, piły spalinowe, wyrzutnie rakiet. Odniesione podczas zabawy sukcesy mają wpływ na rozwój umiejętności postaci. Fabuła jest nieliniowa. Za eliminowanie mutantów gracz zarabia pieniądze, za które należy kupować broń i amunicję. Gra zawiera edytor poziomów i modów. Funkcja ZEDtime umożliwia oglądanie walki w spowolnionym tempie. Produkt posiada możliwość rozgrywki wieloosobowej w trybie kooperacji dla maksymalnie 6 osób.