Assassin's Creed: Brotherhood to kolejna odsłona serii gier akcji, ukazana z perspektywy trzeciej osoby. Akcja gry toczy się w XVI-wiecznym Rzymie. Gracz kieruje postacią Ezio Auditore de Firenze oraz zakonem zabójców pomagającym bohaterowi w walce z Templariuszami. Do zadań użytkownika należy werbowanie nowych członków do zakonu i ich wytrenowanie, a także odpowiednie rozmieszczenie ich w mieście. Dzięki temu w razie potrzeby Ezio może skorzystać z pomocy owych zakonników. Bohater powinien również starać się zdobywać przychylność mieszkańców Rzymu - dzięki temu odblokowywane są nowe frakcje i misje. Podczas zabawy spotkać można szereg postaci historycznych, np. Leonardo da Vinci, Niccolo Machiavelliego, czy Caterinę Sforzę. Do dyspozycji rozgrywającego oddano szereg broni, m.in. topór, wachlarz, strzykawki, szpony i SwitchBlade (ukryte ostrze używane przez Templariuszy). Oprócz tego korzystać można z wynalazków Leonardo da Vinci: spadochronu i maszyny latającej. Produkt posiada możliwość rozgrywki wieloosobowej przez Internet. W trybie tym gracze mogą stanąć zarówno po stronie Ezio jak i Templariuszy. Akcja toczy się na specjalnie zaprojektowanych mapach.