Nastoletni samotnik, Peter (Andrew Garfield), całymi dniami próbuje odkryć sekret ze swojej przeszłości, a także zdobyć serce ślicznej Gwen Stacy (Emma Stone). Tajemnicza teczka jego ojca, który porzucił Petera, gdy ten był jeszcze dzieckiem, prowadzi chłopaka do byłego współpracownika ojca, Dr. Connorsa. Odkrycie rodzinnego sekretu ukształtuje przeznaczenie i wpłynie na przyszłość Petera jako Spider-Mana stawiając go twarzą w twarz z mrocznym alter ego Connorsa - Jaszczurem.