Wrażenia z misji w Assassin’s Creed będą silniejsze niż kiedykolwiek. Ezio powraca we wszechpotężnej walce przeciwko Zakonowi Templariuszy. Teraz, jako legendarny Mistrz Asasynów musi udać się w podróż do Rzymu, centrum władzy, chciwości i korupcji, aby dostać się do serca siedziby wroga.  Do pokonania skorumpowanych tyranów będzie potrzebował nie tylko siły, ale przede wszystkim umiejętności współpracy. Ezio będzie dowodził całym Bractwem, które zjednoczy się po jego stronie.  Tylko wspólnym wysiłkiem uda im się pokonać śmiertelnego wroga Assassynów.

Po raz pierwszy, Assassin’s Creed Brotherhood będzie oferował, nigdy wcześniej niewidziany poziom rozgrywki wieloosobowej. Gracze będą mogli pomagać samym Templariuszom, używając firmy Abstergo oraz jej wynalazków. Dzięki temu nabędą umiejętności walki Asasynów, aby ich zniszczyć raz na zawsze. W grze będzie można wybrać jedną z wielu unikalnych postaci, z których każda będzie dysponować specjalną bronią oraz technikami walki, aby użyć ich w grze przeciwko innymi użytkownikom na całym świecie w różnych modułach rozgrywki wieloosobowej.